胶原酶 来源于溶组织梭菌
胶原酶已被用于制备动脉组织,用于研究晚期糖基化终产物(AGE)。该酶还与其他蛋白酶一起用于人肿瘤、小鼠肾、人脑、肺上皮和许多其他组织的解聚。它在肝脏和肾脏灌注研究,胰腺消化和非实质肝细胞的分离中也是有效的。该酶经过了肝细胞释放的适用性测试,针对每只大鼠肝脏的100 mL总体积中的浓度大约为1 mg/mL。
适用于制备用于测序的单细胞悬液。
生化/生理作用
组织溶梭菌产生两类胶原酶。梭菌胶原酶比哺乳动物胶原酶更高效。它在胶原三螺旋中的多个裂解位点进行裂解。梭菌胶原酶与气性坏疽中的细菌入侵有关。
从组织中进行细胞的有效释放需要胶原酶等的作用。每摩尔的胶原酶可被四克的钙原子(Ca2+)所激活。培养滤液中被认为至少含有7种分子量在68-130kDa之间的不同蛋白酶。最适pH为6.3-6.8。该酶通常用于消化组织样品中的结缔成分以释放单个细胞。胶原酶处理可引起某些细胞的死亡。通常,使用0.1至5 mg/mL的浓度用于消化。反应时间可从15分钟至数小时,并在不引起过多细胞死亡的情况下达到令人满意的细胞解离效果。优选含有钙和BSA的Krebs Ringer缓冲液,而且Zn2+是活性所必需的。
每摩尔胶原蛋白酶被4g原子钙活化。 它被乙二醇-双(β-氨基乙基醚)-N,NN′,N′-四乙酸,β-巯基乙醇、巯基乙酸和8-羟基喹啉抑制。
注意
以原包装形式,该产品在-20°C下可稳定保存6年。在37℃、50℃和-20℃下30天内,FALGPA或蛋白酶活性没有损失。如果分液(10mg/mL)形式快速冷冻并且在-20℃下冷冻保存,粗胶原酶的溶液可保持稳定。进一步的冻融步骤会破坏溶液稳定性。 当在冰上保持时,该产品可在7小时内保持100%活性。
单位定义
一个胶原蛋白消化单元(CDU)从牛跟腱胶原蛋白中释放的肽链量和1.0 μ亮an酸,5小时,pH7.4,37℃,在钙离子存在下的茚三酮颜色相同。一个 FALGPA水解单元每分钟,25℃,水解1.0 μmole 呋喃基丙烯酰-Leu-Gly-Pro-Ala。一个梭菌蛋白酶单元在DTT存在下,pH7.6,25℃,每分钟水解1.0 μmole BAEE。
制备说明
溶液通常是在TESCA缓冲液(含有50mM TES、0.36mM氯化钙,37℃时pH 7.4)中按1-2 mg/mL进行制备。
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